1三种工具酶
限制性核酸内切酶（限制酶）：识别特定序列，切割双链 DNA，形成黏性末端或平末端。
DNA 连接酶：催化 DNA 片段相邻 5'-P 与 3'-OH 形成磷酸二酯键。
DNA 聚合酶：PCR 体外扩增 DNA。
2载体（质粒）
能将目的基因携带入受体细胞并复制的 DNA 分子。常用：质粒、λ 噬菌体、动植物病毒。
载体条件：能复制、有标记基因、有多个限制酶切位点、能表达。
3四大步骤
① 提取目的基因
② 构建表达载体（限制酶+连接酶）
③ 导入受体细胞（转化）
④ 检测与鉴定（标记基因筛选+表达鉴定）
4应用实例
原核生物：生产人胰岛素、干扰素、生长激素
转基因植物：抗虫棉（Bt毒蛋白基因）、抗病、抗除草剂
基因治疗：将正常基因导入患者的体细胞